四、在丹阳最终分离到姬鼠型出血热病毒

谁将成为我们的合作伙伴，这是经过一番选择的。江苏省的裘学昭大夫为人正直，工作积极肯干，学术上又有很高造诣，在省站病毒学方面又是数一数二人物，说话有分量。她与同事及下属单位同志关系也很好，由她组织的协作组既团结又有朝气。我们又吸收安徽医科所倪大石主任等人，力量还是很强的。但是连续三年的分离工作，结果都是似是而非：用对流免疫电泳检查，今天有了结果，明天又没有了；用免疫荧光检查姬鼠的培养细胞也非常困难，主要是几天也做不成一片好的细胞片来，而且经常因孵箱温度突然升高，细胞全部脱落，无法检查；小廖摸索的ELISA也还不好用。每天从疫区捕捉来的黑线姬鼠有上百头，而每天用做组织细胞培养的鼠不过20头（每个鼠肺组织消化成细胞，单独培养，非常繁琐、复杂），因而在动物室里饲养了多批从疫区捕捉来的黑线姬鼠等待培养检测。工作真是少、慢、差、废，大家真的感到“一筹莫展”。看来不解决快速检测的方法问题，就不易获得有意义的结果，大家的信心和热情也会丧失。为了顺利到达“彼岸”，解决“船和桥”的问题迫在眉睫。看来，要想推进工作的进展，应用切片加上免疫荧光检测，有可能达到目的。可见冰冻切片机是技术上的关键设施（在以前我已多次征询过多位专家，他们认为只要室内温度控制好，金华无线电厂的切片机是适用的），是当时需要解决的“船和桥”的问题。在80年11月的一天，我单独一人奔赴浙江金华无线电厂，去购买冰冻切片机。我国改革开放不久，百业待兴，火车交通非常紧张，上午9点左右在上海上车，车厢早已挤的满满当当，几无插足之地。我只能在车厢的连接区上身背部紧靠车门，一只脚插在席地而坐的旅客间，手里还提着一个不小的旅行包，累了再换另一只脚或手，不食、不喝、不走动也无法上厕所。就这样整整呆了8个多小时，下来时走不了路了。在车站外面静坐片刻，去找人力三轮车站，想让他们把我拉到无线电厂。但正逢师傅们吃晚饭，需要等一个小时。当时，我想金华城市不大，有一个小时，我走也可以把该厂找到。果不其然，步行不到一小时就到了该厂。办公室的同志很热情，安排我住在他们軽工业局的招待所里。天气已很凉，但招待所提供的还是发了霉的草席子，室内还保留了几只未来得及冬眠的蚊子。旅途的辛劳和住宿条件的低劣是世空见惯的，总比住大车店、安棚强百倍。记得有几次去内蒙，住在保昌的一家大车店里，除了臭被、臭脚味外，还要加上跳蚤和臭虫，叫人不得入眠。那时整个国家经济发展水平较低，还有很多贫困人口不得温饱，哪有更多财力改善交通运输和各方面的条件呢？当然有些是人为的，本来可以做得更好些。虽然我也经常提起过那些在其工作岗位上没有尽责的人们，但并没因此而使自己工作受到影响。第二天，我又到了厂部，看到了切片机，就即订了一架，让他们直寄丹阳卫生防疫站。

一周时间，切片机到了，大家都不知如何使用。由小赵联系去镇江医专参观，目睹了他们制作切片的全过程，使我们大家心里才有了底。回到丹阳，把切片机装好以后，我首先试用，想掌握一些经验，但很快被年轻的同事夺了过去，大家学习新技术（切片）的热情可高了，不久好多同事就熟练地掌握了。

第二年春天，那就是1981年，宋老师亲临丹阳现场实验室与江苏同志一起，从疫区的黑线姬鼠肺中，捡出了很好的荧光抗原鼠肺，将1％（A1）和5％（A5）的鼠肺悬液分别接种非疫区正常黑线姬鼠，获得了能连续传3代的结果，从传代的鼠肺切片中可以看到细胞核周围葡萄样斑点状黄绿色荧光，这预示着病毒分离的成功，给整个工作带来了光明前途。

那年我从山西、河南出差回京后不久，去丹阳接宋老师的班，与江苏同志接着传第四代，第四代的结果真令人失望和害怕：发现传代鼠肺切片细胞核周围葡萄样的荧光不见了，而代以细小微弱的斑点。我心想，不要在我的手里给丢失了，在历史上这种情况曾经发生过。我马上又看这两代的病毒在同样鼠上滴定肺切片的荧光结果，发现低稀释度与传代鼠的一样，还是不好；但很庆幸高稀释度却一个比一个好。我很快就意识到：原来在传第四代时，我们要求规范化操作，正确配置悬液浓度，鼠肺在天平上称重，实际上在第四代所使用的悬液浓度比前三代要高的多；加之每20天传一次代，传代鼠身体会有抗体，杀死鼠放血不好，肺中瘀有大量的血，制成悬液时又好象病毒和抗体放在一起，病毒被中和了。此后的结果证明，这种推测是完全正确的。我们规定至少要100～1000倍稀释，才用于传代，从第五代开始直至传到第七代，荧光出现很好，工作非常顺利，病毒滴度也达到5～6个对数。病毒分离能否成功，病毒传代是最好的试金石，如果能连续传代，就是成功了。获得出血热病毒，这是多少年人们梦寐以求的结果啊，那个高兴劲就甭提了！为了应对医科院组织的是否真的分离到病毒可靠性检查，我们将传代鼠肺进行大量切片，以备用于双盲血清的检测。我们只用一小叶传代鼠肺，就切了350多张，这是年轻同志轮流进行的。在切片过程中，有一事想起来挺有趣：当时正逢1982年15届世界杯预选赛，中国队对科威特，我同意晚上先看足球，切片，看完了再说。晚上8点，大家就围坐在站里为我们提供的一架黑白电视机前面观看，都希望中国队能胜。但不巧，上半场中国队被灌进去了2球，有的同志生气了，不愿看了，主动提早上了班；下半场，中国队却又以4：2反败为胜，打出了志气，打出了精神，大家真是高兴。比赛完了后，许多同事主动去接班，并告许那同事比赛最终结果。那同事一方面可惜自己没有看到，另一方面依然感到十分欣慰！他与少数同事直把肺组织全部切完，直至凌晨3~4点钟，他们不想睡觉，很激动，因为足球赢了受到鼓舞！可见竞技体育对人们精神的影响。

为了证明实验结果可重复性、可靠性，我们又重新从新捕获的第九号黑线姬鼠中分离到了A9株病毒，只传三代阳性率达100％。此株病毒后被WHO出血热病毒参考中心收录，作为中国的代表株

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